«Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա»–ի խմբագրումների տարբերություն
Content deleted Content added
չNo edit summary |
չ Ռոբոտ․ Տեքստի ավտոմատ փոխարինում (- , +,, -, +, , - + ) |
||
Տող 37.
=== [[Բնափոխում]] (դենատուրացիա): ===
Առաջին էտապում անհրաժեշտ է բնափոխել նմուշային ԴՆԹ-ն։ Դրա համար փոխազդող խառնուրդը տաքացնում են մինչև 92-95˚C
=== [[Շիկամշակում]]: ===
Տող 50.
ԴՆԹ-ի առանձին հատվածի քանակի աստիճանական մեծացում կարելի է արտահայտել հետևյալ բանաձևով՝
A=M*(2n-n-1)~2n
որտեղ ` A-ամպլիֆիկացիայի համար պրայմերների քանակն է
M -ԴՆԹ-ի սկզբնական քանակը,
n - ամպլիֆիկացիայի ցիկլերի թիվը։
Փաստորեն, որոշ տվյալների հիման վրա, ամպլիֆիկացիայի առանձին ցիկլերի արդյունավետության աստիճանը կազմում է 78-97%: Այս արժեքը կարող է ավելի քիչ լինել այն դեպում, երբ փոխազդման խառնուրդում առկա լինեն [[ինհիբիտոր]]ներ։ Այդ պատճառով, ամպլիֆիկացիայի արտադրանքի իրական քանակը ավելի լավ կնկարագրի հետևյալ հավասարումը`
Տող 59.
Արժե նկատել, որ ամպլիֆիկացիայի ընթացքում նախնական շղթայի վրա սինթեզվում են նաև երկարավուն հատվածներ, այնուամենայնիվ, դրանց կուտակումը տեղի է ունենում միայն [[թվաբանական պրոգրեսիա]]յով հետևյալ բանաձևով `
K = M*n
որտեղ՝ K - ամպլիֆիկացիայի երկարավուն արտադրանքի քանակն է,
n – ցիկլերի թիվը։
Այսպիսով, առանձին հատվածները սահմանափակված պայմաններում առաջինն են հայտնվում 2-րդ ցիկլի վերջում, կուտակվում են երկրաչափական պրոգրեսիայով և շատ շուտով սկսում եմ գերակշռել ամպլիֆիկացիայի արտադրնքների թվում։
Տող 66.
Նկատի առնենք, որ ամպլիֆիկացիայի պրոդուկտների կուտակման ընթացքը երկրաչափական պրոգրեսիայով ընթանում է միայն սահմանափակ ժամկետում, իսկ հետո դրա արդյունավետությունը բեկումնային ընկնում է։ Սա կապված է այսպես կոչված ՙբարձրահարթի՚ էֆեկտով։
Այս տերմինն օգտագործում են ամպլիֆիկացիայի վերջին ցիկլերում ՊՇՌ-ի պրոդուկտների կուտակման ընթացքը նկարագրելու համար, երբ ամպլիկոնների քանակը հասնում է 0, 3-1 [[պմոլ|մոլ]]ի։
Կախված պայմաններից և ամպլիֆիկացիայի փոխազդման ցիկլերի քանակից, ՙբարձրահարթի՚ էֆեկտին հասնելու պահին ազդում են [[սուբստրատ]]ների (դնՏՖ-ի և պրայմերների) [[ուտիլիզացի]]ան (օգտագործումը), [[ռեակտանտ]]ների կայունությունը (դնՏՖ-ի և ֆերմենտի), ինհիբիտորների քանակը ներառյալ [[պիրոֆոսֆատ]]ները և ԴՆԹ-[[դուպլեքս]]ները, մրցակցությունը ոչ յուրահատուկ արտադրանքների ռեակտատների կամ պրայմեր-[[դիմերմեր]]ի համար, առանձնահատուկ արտադրանքի խտությունը և ոչ ամբողջական բնափոխումը ազդում են ամպլիֆիկացիայի արտադրանքների բարձր [[խտության|խտություն]] աստիճանի դեպքում։ Որքան փոքր է հետազոտվող ԴՆԹ-ի սկզբնական խտությունը, այնքան բարձր է փոխազդման ելքի ռիսկը դեպի ՙբարձրահարթի՚ էֆեկտը։ Այս պահը կարող է վրա հասնել մինչև այն, երբ ամպլիֆիկացիայի առանձնահատուկ արտադրանքի քանակը բավարար կլինի, որպեսզի հնարավոր դառնա վերլուծման ենթարկել դրանց։ Միայն լավագույն թեստ-համակարգերն են թույլ տալիս խուսափել դրանից։
Տող 91.
== Արտաքին հղումներ ==
* http://users.ugent.be/~avierstr/principles/pcr.html
* http://www.google.am/imgres?um=1&hl=ru&sa=N&tbm=isch&tbnid=oYzYreeIGuCFSM:&imgrefurl=http://acccn.net/Bio/book/BearFlag45/Biology1A/LectureNotes/lec24.html&docid=r7uSXfS2i49D3M&imgurl=http://acccn.net/Bio/book/BearFlag45/Biology1A/LectureNotes/LNPics/Recomb/pcr.gif&w=406&h=438&ei=BIWmUOGsIIK2hAeo0YCoBg&zoom=1&iact=hc&vpx=1013&vpy=137&dur=940&hovh=233&hovw=216&tx=97&ty=154&sig=117496208067358221406&page=1&tbnh=153&tbnw=142&start=0&ndsp=22&ved=1t:429, r:6, s:0, i:84&biw=1366&bih=603
{{ՎՊԵ|Polymerase chain reaction}}
| |||